临床推广:“脾不统血证”斑马鱼出血模型具有临床一致性

2018-01-23    阅读次数:1675

目的:建立斑马鱼脑部与心脏出血两种动物模型,分析是否与临床的脾不统血证具有一致性,并观察健脾益气摄血止血效果,为临床推广应用提供依据。


思路:1. 为寻找用辛伐他汀诱导的斑马鱼出血模型与临床“脾不统血”证出血的相似性,首先选择了出血、血流量与运动速度降低三个基本条件,从正面进行论断。


            2. 为进一步从循证医学角度验证,将以脾脏象理论、气血相关理论为指

导,拟定了健脾治则、健脾摄血治则,并进行了药物干预研究进行反证。


方法:第一批实验将野生型 AB 系 60 尾斑马鱼随机分正常与模型两组,正常组常规饲养,模型组以 50μ M 辛伐他汀处理 24 小时。


            第二批实验:将黑色素等位基因突变型Albino 品系斑马鱼分正常组、模型组(常规饲养)及 A、B 药物实验组,以血流量、运动速度、出血发生率与出血改善率为观察指标,并分析相关数据。


**该实验按照盲法设计原理,由设计者拟定了不同治则的中药处方,交予北京康仁堂制药有限公司生产,由公司制定专门人员按照颗粒剂工艺水提处理 90并获得实验用药,并以 A、B 编号包装后转交研究单位(杭州环特生物科技股份有限公司),由研究者在严格盲态情况下进行实验与数据统计,并将结果转交设计者与药物制备人员,双方依据药物编号揭盲后确认药物组别。**


正面证明结果:①出血现象:在第一批实验中,以辛伐他汀处理 24 小时,即见野生型 AB 系斑马鱼脑部出血;



在第二批实验中,以辛伐他汀处理 30 分钟,即见黑色素等位基因突变型 Albino 品系斑马鱼心脏出血;

 


②血流量测定:两批实验与正常组比较,模型组血流明显下降,均有统计学意义(p<0.001)。



③运动速度:第一批实验与正常组比较,模型组斑马鱼运动速度明显降低,均有统计学意义(p<0.001)。



④出血改善率:单纯健脾益气方对斑马鱼心脏出血无防治效果;健脾益气摄血方能降低斑马鱼心脏出血发生率,提高出血改善率。




反证结果:选定了临床与动物实验共性的出血观察,将肢体倦怠临床宏观症状转化为实验动物运动速度,将气虚无以推运血行转化为检测实验动物血流量,并采用药物干预进行反证。得出的结果为:动物模型的出血、运动速度降低、血流量下降与临床有高度相关性;利用健脾摄血药物干预后止血效果良好。


结论:①辛伐他汀诱导的斑马鱼出血模型与脾不统血证临床表现基本一致。②健脾摄血方能降低辛伐他汀诱导斑马鱼心脏出血发生率,提高出血改善率。