口服验孕药Primodos致胎儿畸形事件的再回顾

2018-09-25    阅读次数:103

20世纪,60年代,孕妇因服用沙利度胺(Thalidomide)导致胎儿畸形的事件,是当时的一场灾难,全球共造成12000多名畸形婴儿。沙利度胺事件以来药物的发育毒性和致畸性评价越来越重要

但大家一定不知道同一时期的另外一个药物Primodos,这是1958-1978年,在英国销售的口服验孕药,是激素类妊娠检查药。如果一名妇女已经怀孕,她体内自身的黄体酮含量比正常高,服药带来的黄体酮水平的上升会在孕妇体内得到平衡,不会产生明显生理现象。但如果她没有怀孕,那么黄体酮的快速飙升会消失,这就类似于女性月经周期的结束,服药后会导致小的出血。基于此,来判断女性是否怀孕。

40年前这款口服验孕药致胎儿畸形在当时的英国媒体中间引起广泛关注,上百个家庭甚至对生产销售该药的公司提起过诉讼,但因当时没有足够证据证实该指控而不了了之。

但在2015年,325号,英国MHRA The Medicines and Healthcare products Regulatory Agency)重新发布公告,邀请感兴趣的个人和组织提供他们认为与口服激素妊娠试验(当时最流行的是Primodos)的使用之间可能存在关联的任何信息,以及对怀孕或随后出生的胎儿有缺陷的不良反应。并举行了听证会。

 

文件:Hormonal pregnancy tests (including Primodos) and possible association with birth defects: Call for evidence  https://www.gov.uk/government/consultations/hormonal-pregnancy-tests-call-for-evidence

目前Primodos已经不再被使用,它的组成成分是10mg醋酸炔诺酮(NA),一种合成孕激素,和0.02mg乙炔雌二醇(EE),一种合成雌激素。但醋酸炔诺酮和乙炔雌二醇,今天仍被用于其他治疗中,比如子宫内膜异位症和避孕药。然而,Primodos是否导致出生缺陷仍然存在争议,目前研究的很少。

    英国阿伯丁大学的科学家们,对Primodos展开研究。他们用醋酸炔诺酮和乙炔雌二醇处理发育中的斑马鱼胚胎。实验表明,醋酸炔诺酮和乙炔雌二醇引起胚胎损伤情况与剂量以及暴露时间有关。药物暴露后,损伤迅速发生,影响多个器官系统。而且,他们发现醋酸炔诺酮乙炔雌二醇混合物可直接影响神经生长和血管形成。

    如研究者将实验分成三组,分别24hpf的斑马鱼胚胎用DMSONA6.25μg/ mL + EE 12.5ng / mLNA12.5μg/ mL + EE 25ng / mL处理,孵育至96hpf。测量整体尺寸,胸鳍PFPF,耳小泡OV和眼睛大小,同时发现,斑马鱼心脏(H)和卵黄囊(YS)都有明显改变

 

黑色三角箭头表示卵黄囊延伸性水肿。黑色箭头表示耳小泡较小。黑色星号表示弯曲的脊柱。

垂直黑线比较了在C'D'E'中 胚胎之间的眼睛直径, NA / EE处理的胚胎中眼睛的直径被改变。

白色星号表示减少(D“)或缺少胸鳍(E”)。 白色箭头表示心包水肿

 

以上实验结果表明醋酸炔诺酮和乙炔雌二醇可能具有致畸作用,与剂量密切相关。胚胎存活率以及严重畸形的发生率,都与剂量相关,如下图。

 

他们同样也设计了实验,表明致畸作用与斑马鱼的胚胎发育阶段也相关。研究者用DMSONA / EE-混合物(NA12.5μg/ mL + EE 25ng / mL)分别处理6hpf24hpf48hpf72hpf的胚胎,孵育24小时,然后固定并成像

 

扭曲的脊柱(灰色箭头);卵黄囊异常/水肿(灰色箭头)较小的眼睛(白色星号);弯曲的脊柱(黑色星号)和心包缺损(黑色箭头)。 比例尺:250μm

 

  研究还表明斑马鱼节间血管、以及体外主动脉内皮细胞(HUVEC培养物血管的形成都受NA / EE-混合物的影响与剂量相关

 

白色箭头表示节间血管的正常位置和模式白色星号表示血管错位,包括血管融合

 

黑色星号表示经处理的HUVEC培养物的无血管和图案不良区域

 

这些研究结果表明,Primodos的成分影响体内各种斑马鱼器官系统的发育,实验也进一步证明这些成分可以影响体外哺乳动物组织的发育。但研究者表明,斑马鱼黄体酮和雌激素受体是否与人体黄体酮和雌激素受体具有相似的结合亲和力尚不清楚,需要对哺乳动物物种进一步详细研究,以确定Primodos成分的可能致畸作用。他们对斑马鱼胚胎的研究为了解药物/化合物的作用和确定药物/化合物的潜在作用提供了一个起点。这为进一步和更详细的哺乳动物物种研究提供了基础和推理

在发育毒性和致畸性评价模型中,主流的模型是孕大鼠和妊娠兔子,但其实验周期长,操作复杂,成本很高。斑马鱼模型用于药物发育毒性和致畸性快速评价中,实验周期短,操作简单,实验结果观察方便,成本低,具有优势。斑马鱼模型,结合体外细胞模型和哺乳动物模型,能够降低药物育毒性和致畸性的风险。在国际上,斑马鱼模型已广泛应用于药物早期安全性评价和毒理学研究,辉瑞、默克、强生、阿斯利康等跨国医药巨头都在用斑马鱼进行药物早期安全性评价。FDAEMA早在2009年就通过了斑马鱼安全药理学数据的GLP检查。中国重大新药创制专项自2012年开始将斑马鱼药物安全性评价技术列为了关键技术并连续滚动支持。

本文所提到的实验,参考文献Scientific Reports, (2018) 8: 2917. DOI: 10.1038/s41598-018-21318-9.