基因敲除:    阅读次数:1579


TALEN
TALEN中文名为类转录激活因子效应物核酸酶。植物病原菌—黄单胞杆菌中 TALE(Transcription activator-like effector)家族的蛋白结构单元与 DNA 靶序列之间存在的关系,人们利用TALE蛋白这种特殊的DNA结构跟FokⅠ核酸酶结构域融合构成人工 TALE 核酸酶,理论上可以对任何生物进行基因打靶。 实验周期:合成TALEN 2周 验证有效性1周 得到稳定遗传的F2代纯合子需九个月。


CAS9
近几十年来,随着全基因组测序技术的不断成熟,我们在各种细菌和古细菌中也陆续发现了很多成簇的、规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences,即CRISPR序列)和CRISPR相关基因(CRISPR-associated genes, Cas gene)。研究发现,这些CRISPR序列与很多病毒或者质粒的DNA序列是互补的,说明这套CRISPR–Cas系统很有可能是生物体抵御病毒等外来入侵者的一套特异性防御机制,就好像是另外一套适应性免疫反应系统。


目前,来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。(Cas9蛋白)含有两个核酸酶结构域,可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入DNA,形成RNA-DNA复合结构,进而对目的DNA双链进行切割,使DNA双链断裂。


CAS9优势
1.只需合成一个sgRNA就能实现对基因的特异修饰。
2.编码gRNA的序列较短,利于合成。


斑马鱼优势
1.斑马鱼早期发育快,胚胎,利于观察早期表型。
2.斑马鱼性成熟快,一般在80-90天性成熟。斑马鱼的繁殖周期约7天左右雌鱼每次产卵300余枚,最多可达上千枚。斑马鱼的快速性成熟利于筛选基因型,可在九个月得到稳定遗传的突变株。
实验周期:合成CAS9 1周 验证有效性1周 得到稳定遗传的F2代纯合子需九个月。