皮肤外植体评价样品保湿功效

【实验原理】

糖胺聚糖（glycosaminoglycan, GAGs），又称粘多糖、氨基多糖或酸性多糖，是一类长链多糖分子，主要存在于高等动物的结缔组织中，在皮肤组织中广泛存在。皮肤保湿与糖胺聚糖之间存在密切的生物学关系，糖胺聚糖具有极强的亲水性，能结合大量水分子，此外还是皮肤细胞外基质的重要组成部分，对维持皮肤水分、弹性和结构完整性起着关键作用。糖胺聚糖可分为五个主要类别：透明质酸（HA）、硫酸软骨素（CS）、硫酸皮肤素（DS）、硫酸角质素（KS）、硫酸乙酰肝素和肝素（HP）。其中透明质酸（Hyaluronic acid），简称为HA，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖胺组成的双糖单位糖胺聚糖。其分子结构能够通过氢键结合超过自身600倍的水分，构成充满水分的三维网状结构，为皮肤组织提供支撑以及维持组织的稳定性和弹性。

AB-PAS染色是一种组合染色方法，由阿利新蓝（Alcian Blue, AB）和过碘酸-雪芙（Periodic Acid-Schiff, PAS）染色液组成。阿利新蓝可以与组织中含有阴离子的酸性基团形成不溶性复合物而呈现蓝色，再与过碘酸-雪芙复染就可以显示不同黏蛋白成分。AB-PAS染色可将糖原、中性黏蛋白、各种糖蛋白染成深红或紫红色，将酸性黏蛋白、蛋白多糖和透明质酸染成蓝色。

皮肤外植体是通过体外气液培养的功效测试模型，针对对皮肤无刺激性的油溶性样品可直接涂抹在皮肤表皮进行给样，因此可利用皮肤外植体模型，通过AB-PAS染色的方法检测皮肤组织中GAGs的生成，或者通过ELISA检测皮肤组织中HA的含量，以此来评价样品的保湿功效。

【评价指标】

1、糖胺聚糖GAGs

2、透明质酸HA含量

【实验方案】

实验一 皮肤外植体GAGs检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体预处理及无菌培养——加药处理（正常对照组：不处理；待测样品组：待测样品表面给药）——固定——石蜡包埋——石蜡切片——AB-PAS染色——生物显微镜拍照——结果分析

实验二 皮肤外植体HA含量检测

皮肤外植体获取与消毒——皮肤外植体预处理及无菌培养——加药处理（正常对照组：不处理；待测样品组：待测样品表面给药）——收样——裂解——ELISA检测——酶标仪检测——结果分析

【结果展示】

图1 皮肤外植体GAGs检测典型图及柱形图

图2 皮肤外植体HA含量检测柱形图

【检测结论】

与正常对照组相比，样品组皮肤外植体组织中糖胺聚糖相对面积百分比均显著增加，表明样品能促进糖胺聚糖的产生，即样品具有保湿功效。

与正常对照组相比，样品组皮肤外植体中透明质酸含量显著增加，表明样品能促进透明质酸的产生，即样品具有保湿功效。

【参考文献】

[1]张荣鑫.N-乙酰葡萄糖胺对皮肤角质形成细胞透明质酸合成的影响[D].大连医科大学, 2007.

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