利用细胞划痕实验评价供试品的皮肤屏障修复功效

【评价原理】

随着年龄的增加，皮肤接受外来环境（物理损伤，化学试剂等）的影响，造成皮 肤的日益老化，在老化的过程中，细胞的损伤逐渐积累，进一步加速了皮肤老化。人皮肤角质形成细胞（human immortalized keratinocytes, HACAT）是构成皮肤表皮层的主要细胞类型，并且具有表皮构成、创伤修复、细胞角化、细胞因子分泌和免疫监视等功能，常被用于生物医学领域作为体外皮肤研究的细胞系，例如皮肤修复愈合和防晒等，在伤口愈合的早期阶段，表皮中角化形成细胞被激活，并迁移到创伤部位诱导伤口收缩，接着进行细胞增殖以皮肤修复重建。因此，角质形成细胞对于伤口愈合有重要作用。

利用人永生化角质形成细胞HaCaT建立划痕实验模型，检测供试品是否对细胞具有促增殖及修复划痕的作用，作为其是否具有修复皮肤损伤的辅助性依据。

【实验方案】

将对数生长期的HaCat消化重悬后进行计数，接种6×105个细胞/孔培养（37℃、5%CO2、24h），分别设置空白组、阳性对照组和样品组。

待细胞100%融合后，用枪头比着载玻片，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。划痕结束后，用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，对照组加入1%血清培养基，阳性对照组加入含100ng/ml EGF的1%血清培养基，实验组加入含一定浓度受试物的1%血清培养基。放入37度5%CO2培养箱，培养。按0，6， 24小时取样，拍照，计算愈合率：

【评价指标】

HaCaT细胞修复功效表型图、愈合率

结果展示

图1. 供试品对HaCaT细胞的修复功效表型图

【评价结论】

1、据以上结果可知该供试品可以促进HaCat细胞增殖，初步判定其具有皮肤屏障修复功效。