斑马鱼基因敲除品系制备

服务简介

1.基因敲除(Gene Knockout)

根据给定GeneID或Gene name，分析基因保守结构域，在保守结构域或客户指定区域设计靶点并制备靶点gRNA，gRNA共注射使基因产生移码突变，通过PCR筛选得到稳定遗传品系。

2. 基因敲除技术特点

2.1 通过将基因敲除斑马鱼品系与野生型相比较，研究者可以揭示特定基因的功能。

2.2 在基因组水平上将目标基因敲除，遗传背景干净清晰，是研究基因功能的金标准。

服务流程

▲根据客户提供的GeneID或Gene name进行基因分析→▲mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成→▲高效gRNA靶点的筛选及效率验证→▲F0代斑马鱼的可遗传性筛选→▲杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定。

环特生物优势

成熟的基因敲除技术快速获得稳定品系；

多靶点共注射F0代验证基因功能。

斑马鱼敲除品系成功案例

1、基因分析

分析目的基因的保守结构域；

2、靶点筛选

设计4个gRNA靶点，PCR检测包含靶点的区域真实序列，显微注射验证靶点效率；

3、大规模注射养殖F0

gRNA 注射，共养殖 F0 约 80 条用于后期Founder筛选；

4、Founder 筛选

F0代斑马鱼与野生型外交，收集48hpf的F1胚胎抽取基因组，PCR鉴定，测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变，然后TA clone验证其可能产生的突变方式；

5、F1 代筛选

F1代斑马鱼剪尾筛选，TA clone验证突变方式：

    通过对测序图谱的分析获得突变方式为：-5bp，产生移码突变的敲除斑马鱼；

    通过对测序图谱的分析获得突变方式为：-4-3bp，产生移码突变的敲除斑马鱼模型。

参考文献

Hwang WY, Fu Y, et al.. Nat Biotechnol. 2013 Mar;31(3):227-9.pdf

Hoshijima K, Jurynec MJ, et al. Dev Cell. 2016 Mar 21;36(6):654-67.pdf

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