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【评价原理】
斑马鱼表皮具有一定的渗透压耐受范围,超过耐受范围将产生脱水现象,尾部面积也会变小,因此使用高渗透溶液可以建立斑马鱼补水保湿的诱导模型。水通道蛋白(Aquaporin, AQP)广泛存在于生物体的各组织部位,影响着生物体水代谢的过程。AQP3在表皮基底及棘突层的角质形成细胞质膜中高度表达,并在这些质膜中作为水、甘油运输蛋白,促进皮肤水合作用。人类透明质酸合成酶(HAS)是一类在透明质酸(HA)合成过程中发挥重要作用的酶,HAS3在表皮透明质酸的合成中起主要作用。分析斑马鱼尾部面积,检测HAS3、AQP3基因表达量,在一定程度上可以评价供试品保湿作用。
我们评价斑马鱼补水保湿功效有2个指标:1.斑马鱼尾部面积;2.HAS3、AQP3基因表达量。
【实验方案】
将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和供试品组。正常对照组不做处理,模型对照组用氯化钠溶液处理,供试品组在用氯化钠处理的同时定量加入受试的供试品。孵育一段时间后,对斑马鱼进行拍照分析斑马鱼尾部面积,qPCR试剂盒检测HAS3基因表达量、AQP3基因表达量,评价供试品的保湿功效。
【结果展示】
图1. 斑马鱼尾部面积(红色区域为尾部面积)
可以看到,模型对照组尾鳍面积减小,供试品组相对模型组显著增加尾鳍面积。
【评价结论】
1.经过各组斑马鱼的对比实验,供试品组的斑马鱼尾部面积与正常对照组相似,没有出现明显的皱缩,证实了该供试品具有明显的保湿功效。
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